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Struktur-Funktionsbeziehungen von Katalase-Peroxidasen

Projektleitung Obinger Christian
Orgeinheit Institut für Biochemie
Laufzeit 01.01.2002 bis- 31.12.2004
Forschungsprojekt aus §26 oder §27 Mitteln
Programm keines
Geldgeber Fonds zur Förderung der wissenschaftlichen Forschung (FWF)
Kompetenzfelder 

Abstract

Peroxidasen katalysieren die vielfältigsten biochemischen Reaktionen. Neben der Entsorgung von toxischen Peroxiden in der Zelle sind sie an der Lignin Biosynthese (einem der häufigsten Biopolymere der Erde), an der unspezischen Immunabwehr des Menschen oder beispielsweise an Hormonbiosynthesen (z.B. in der Schilddrüse) beteiligt. Peroxidasen der Klasse I der Superfamilie I (dazu gehören Enzyme aus Bakterien, Pilzen und Pflanzen) sind äußerst interessante Studienobjekte der Enzymologie. Zu Klasse I Peroxidasen gehören bakterielle Katalase-Peroxidasen, Cytochrom c Peroxidase aus Hefe und Ascorbat Peroxidasen aus Pflanzen. Trotz sehr hoher Aminosäurehomologie zeigen diese 3 Vertreter hinsichtlich ihrer Reaktivität jedoch sehr starke Unterschiede. Die gemeinsame Funktion ist zwar die Entsorgung des intrazellulär gebildeten toxischen Wasserstoffperoxids, jedoch benötigt Cytochrom c Peroxidase dazu als Elektronendonor ein Protein (Cytochrom c), während Ascorbat Peroxidasen die Wasserstoffperoxid Reduktion mittels des hydrophilen Anions Ascorbinsäure durchführen. Und Katalase-Peroxidasen scheinen (und damit sind sie einzigartig unter Peroxidasen) Wasserstoffperoxid ähnlich den typischen Katalasen mit Hilfe eines weiteren Peroxid Moleküls unter Freisetzung von Wasser und Sauerstoff zu entsorgen. Daneben zeigen sie aber auch typische Peroxidase Aktivitäten und können hydrophobe aromatische Verbindungen oxidieren. Sie sind also bifunktionell (daher die Bezeichnung Katalase-Peroxidasen). Aufgrund dieser unterschiedlichen Reaktivität trotz hoher Homologie sind Klasse I Peroxidasen zur Untersuchung von Struktur-Funktionsbeziehungen optimal geeignet. Da der Mechanismus ihrer katalytischen Aktivität bislang unbekannt ist, werden in diesem Projekt rekombinante Proteine aus drei verschiedenen Bakterien untersucht. Durch ortsspezifische Mutagenese in Kombination mit verschiedenen spektroskopischen Methoden (UV-Vis Spektroskopie, Resonanz Raman Spektroskopie, Elektronen Spin Resonanz Spektroskopie) und kinetischen Untersuchungsmethoden (Multi-mixing Stopped-flow Spektroskopie, Polarographie) soll der Reaktionsmechanismus aufgeklärt werden und ein wertvoller Beitrag zum Verständnis von Hämproteinen (zu denen neben Peroxidasen auch Katalasen, Myoglobin, Hämoglobin, Cytochrome und viele andere im Stoffwechsel sehr wichtige Enzyme zählen) geleistet werden. Insbesondere ermöglichen diese Untersuchungsmethoden die Charakterisierung der Struktur und Reaktivität der Redoxintermediate dieser metallhältigen Enzyme und das Verständnis der Rolle der Aminosäuren der Proteinmatrix an der Substratbindung und -oxidation, am Elektronentransport zur prosthetischen Hämgruppierung und an der Wasserstoffperoxid Reduktion (und bei Katalase Aktivität auch Wasserstoffperoxid Oxidation). Da die dreidimensionale Struktur dieser Enzyme bislang unbekannt ist, sind zudem umfangreiche Kristallisationsversuche geplant.

Publikationen

Mitarbeiter*innen

Christian Obinger

Univ.Prof. Mag.rer.nat. Dr.rer.nat. Christian Obinger
christian.obinger@boku.ac.at
Tel: +43 1 47654-10011, 77273

Projektleiter*in

01.01.2002 - 31.12.2004

Christa Jakopitsch

Mag.Dr. Christa Jakopitsch
Tel: +43 1 47654-33061

Projektmitarbeiter*in

01.01.2002 - 31.12.2004

Martina Paumann-Page

Dipl.-Ing. Dr.rer.nat. Martina Paumann-Page

Projektmitarbeiter*in

01.01.2002 - 31.12.2004

BOKU Partner

Institut für Biochemie

Rolle Koordinator

Externe Partner

Institute of Chemistry

Giulietta Smulevich

Partner

Section Bioenergetics, Biophysics of Oxidative Stress_x000D_ CEA-Saclay, France

Anabella Ivancich

Partner