BOKU - Universität für Bodenkultur Wien - Forschungsinformationssystem
Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:
Kamal Khorramian
(2013):
Proteomanalysen von CHO-Zellen mittels 2D-GE und MALDI-TOF/TOF-Massenspektrometrie.
Diplomarbeit / Masterarbeit - Institut für Angewandte Mikrobiologie (IAM),
BOKU-Universität für Bodenkultur,
pp 81.
UB BOKU
obvsg
- Abstract:
- Um ein besseres Verständnis über die Proteine von CHO-Zellen zu erlangen, wurde hier eine vergleichende Proteomanalyse der CHO-Zelllinien mittels 2D-GE und MALDI-TOF/TOF durchgeführt. Die Proteom-Forschung befähigt uns die unterschiedlich regulierten Proteine in CHO-Zelllinen zu identifizieren und die biologischen Funktionen zu klären. Aus diesem Grund wurde eine optimierte 2D-GE Methode im Rahmen dieser Arbeit für die Protein-Trennung der CHO-Zellen entwickelt. Die CHO-Zellpellets wurden mit Lysispuffer aufgeschlossen. Nach der Proteinbestimmung mittels Braford-Test wurde ein Proteinkonzentrat von 50 µg auf 17 cm IPG Gelstreifen geladen. Die isoelektrische Fokussierung wurde zuerst 12 h lang mit einem Gradienten zwischen 200 V und 8000 V durchgeführt und die Proteine getrennt. Die Fokussierungszeit betrug 12 h + 12 h, was ca. 45000 Vh entspricht. Nach der Fokussierungs wurden die IPG Gelstreifen unmittelbar mit DTT und IAA äquilibriert, danach wurde die zweite Dimension gestartet. Nach einem Vergelich der Gelspots mittels DeCyder Programm von CHO-S und CHO-K1 Zelllinien wurden 2882 Spots festgestellt, davon wurden 9 Proteinspots nach ihrer Änderung ausgewählt und mit MALDI-TOF/TOF Massenspektrometrie und verschiedenen Suchmaschinen identifiziert. Es konnten 7 Proteine identifiziert werden: Alpha-Enolase, Phosphoglyceratmutase-1, Peroxiredoxin-4-like, Triosephosphatisomerase, Galectin-3-like, Phosphoglyceratkinase-1 und Peroxiredoxin-1. Von diesen waren zwei Proteine: Galectin-3-like und Peroxiredoxin-1 in CHO-K1 hochreguliert, die restlichen Proteine waren in CHO-S hochreguliert. Die meisten Proteine sind in metabolische Prozesse wie Glykolyse, Zellwachstum, Zellzyklus, Apoptose,… involviert. Im Rahmen dieser Untersuchung konnten einige spezifische und unterschiedlich regulierte Proteine in beiden CHO-S und CHO-K1 Zelllinien identifiziert werden.
- Beurteilende(r): Borth Nicole
- 1.Mitwirkender: