BOKU - Universität für Bodenkultur Wien - Forschungsinformationssystem
Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:
Hannah Engelmaier
(2016):
Purification of secretory immunoglobulins from caprine whey by chromatographic methods.
Diplomarbeit / Masterarbeit - Institut für Biotechnologie,
BOKU-Universität für Bodenkultur,
pp 69.
UB BOKU
obvsg
- Abstract:
- Die Anwendung von Antikörpern ist sowohl in der medizinischen Therapie als auch für verschiedenste wissenschaftliche Zwecke weit verbreitet. Sekretorische Antikörper weisen im Vergleich mit monoklonalem IgG eine höhere Stabilität auf, welche für die Behandlung von gastrointestinalen Krankheiten, wie sie z.B. von Clostridium difficle augelöst werden, von Vorteil ist. Im Zuge dieser Masterarbeit wurde ein zweistufiger chromatographischer Prozess zur Aufreinigung von sekretorischem Immunglobulin A und M (SIgA und SIgM) aus vorbehandelter Ziegenmolke entwickelt und die Schritte zur Vorreinigung von SIg, wie Fällung und Diafiltration, wurden optimiert. Durch fraktionierte PEG-Fällung konnten rund 50% der Aggregat-Fraktion entfernt werden. In einem folgenden Diafiltrationsschritt wurde die Reinheit des Produkts weiter erhöht, während gleichzeitig ein Pufferaustausch durchgeführt wurde. Im ersten Anionenaustausch-Schritt mittels QSepharose FF wurde Serum Albumin aus der Lösung entfernt. In einem zweiten Schritt konnte mittels Verwendung von POROS 50 HQ und Elution via eines linearen Gradienten IgG entfernt und SIgA und IgM getrennt werden, wodurch eine Reinheit von bis zu 97% erreicht wurde. Kationenaustausch-Chromatographie wurde ebenfalls untersucht, wobei Reinheiten von 90% und mehr erreicht wurden. Die dabei erreichte Ausbeute lag jedoch nur knapp über 40% und eine Entfernung von IgG war nicht möglich. Die Bindung von sekretorischem IgA an Toxin A von C. difficile wurde mittels eines Immobilisierungsbasierten Ansatzes (Bio-layer inferometry) und eines Ansatzes, bei dem alle Moleküle in Lösung vorlagen, (SEC-HPLC) untersucht. In beiden Fällen konnte eine Interaktion nicht nachgewiesen werden.
- Beurteilende(r): Hahn Rainer