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Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:
Alexander Mader
(2007):
Generation of mouse monoclonal antobodies against Senescense Evasion Factor and Nop2-like SKIP interacting protein using flow cytometric cell sorting.
Diplomarbeit / Masterarbeit,
BOKU-Universität für Bodenkultur,
pp 70.
UB BOKU
obvsg
- Abstract:
- Das Protein SNEVPrp19/Pso4 (senescence evasion factor) wurde als in vielen Lebewesen vorkommendes, facettenreiche E3 Ligase identifiziert. Es spielt im Alterungsprozess und in der DNS Doppelstrangreparatur eine wichtige Rolle. Weiters ist es auch an Splicing-Reaktionen beteiligt. Das Protein NOPSI (Nop2-like SKIP-interacting protein) wurde als eines der Proteine identifiziert, welches in der genomischen Region zu finden ist, in der die Gene des Williams-Beuren Syndrom (WBS) deletiert sind. Da es Interaktionen zwischen SKIP (ski-interacting protein), einem Protein das in RNA splicing eine Rolle spielt, und NOPSI gibt, nimmt man an das NOPSI möglicherweise auch in Zusammenhang mit Splicing-Reaktionen steht. Um SNEVPrp19/Pso4 und NOPSI besser Untersuchen zu können, werden spezifische monoklonale Antikörper benötigt. Deshalb wurde in dieser Arbeit versucht monoklonale Antikörper gegen SNEVPrp19/Pso4 und NOPSI mittels Hybridoma Technology herzustellen. Um ein zeitintensives “screening” unter der Verwendung der “Limited Dilution” Technik zu umgehen, wurde versucht die fusionierten Hybridoma-Zellen mit der durchflußzytometrischen Zellsortierung zu isolieren. Die Methode „Cold capture”, die die ausgeschiedenen Antikörper in der Membran fixiert, wurde angewandt, um nach einer zweifach Färbung die Maus IgG und spezifisch Antikörper produzierenden Zellen in einem einzelnen Sortierungsschritt zu isolieren. In einer zweiten durchflußzytometrischen Zellsortierung wurden die Hybridoma-Zellen nur mit Anti-Maus IgG-PE angefärbt, um alle potentiellen positiven Maus Antikörper von den restlichen Zellen abzutrennen. Nach ELISA Untersuchungen der isolierten Klone wurde festgestellt, dass weder SNEVPrp19/Pso4 noch NOPSI spezifische Antikörper erhalten wurden.
- Beurteilende(r): Borth Nicole