BOKU - Universität für Bodenkultur Wien - Forschungsinformationssystem
Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:
Philip Klepeisz
(2008):
Proteomic analysis of hypothermically cultivated CHO cells.
Diplomarbeit / Masterarbeit,
BOKU-Universität für Bodenkultur,
pp 92.
UB BOKU
obvsg
FullText
- Abstract:
- In dieser Arbeit wurde die Proteinexpression von hypothermisch kultivierten CHO Zelllinien untersucht. CHO Zelllinien sind von Interesse, da sie für die Produktion von rekombinanten Proteinen verwendet werden. Eine Kultivierung unter hypothermischen Bedingungen ermöglicht eine Verbesserung des Wachstumsverhaltens, des Metabolismus und der Menge an, der von der Zelle, gebildeten rekombinanten Proteinen. Eine Suspensions- Batch Kultivierung von zwei host und zwei rekombinanten Zelllinien wurde bei 33 °C, milden hypothermischen Bedingungen, und bei 37 °C, als Referenz, durchgeführt. Daten über die Zellkonzentration, die Viabilität, die Glucose und die Glutamin Aufnahme sowie die Lactat Produktion wurden erfasst. Darüber hinaus wurden Proben für proteomische Analysen entnommen. Die Analyse dieser Proben mittels der 2D DIGE (differential in gel electrophoresis) Methode ermöglichte eine Identifizierung von signifikant höher oder niedriger exprimierten Proteinen. Interessante Proteine wurden anschließend mittels Massenspektroskopie charakterisiert. Es war nicht möglich alle interessanten Proteine zu charakterisieren. Unter den identifizierten Proteinen waren die Dihydrolipoyl Dehydrogenase, die ERp57 Protein Disulfid Isomerase, der Protein Disulfide Isomerase A6 Precursor und das Stress 70 Protein, die alle bei dem Vergleich der beiden Inkubationstemperaturen, 33 °C and 37 °C, als signifikant runter reguliert gefunden wurden. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die hypothermische Kultivierung einen bedeutenden Einfluss auf die Proteinfaltung und Weiterverarbeitung hat.
- Beurteilende(r): Borth Nicole