BOKU - Universität für Bodenkultur Wien - Forschungsinformationssystem
Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:
Monika Nussbacher
(2008):
Posttranslational modifications of SNEV as cellular stress response.
Diplomarbeit / Masterarbeit,
BOKU-Universität für Bodenkultur,
pp 96.
UB BOKU
obvsg
- Abstract:
- Der Seneszenz Evasions Faktor SNEV stellt ein wichtiges Regulatorprotein im Alterungsprozess einer Zelle dar. Er hat einen Einfluss auf die replikative Lebensspanne, Proteinabbau, DNS Splicing, DNS Reparatur und Stammzellerneuerung. Einer der wichtigsten Einflussfaktoren des Alterungsprozesses ist zellulärer Stress und posttranslationale Modifikationen spielen eine bedeutende Rolle im Koordinieren der zellulären Antwort auf diesen Stress. Daher war das Ziel dieser Arbeit posttranslationale Modifikationen von SNEV nach Stressbehandlungen zu detektieren. Dazu wurde eine stabile hisSNEV Hela Zelllinie etabliert und polyklonale Antiseren gegen hisSNEV in Maus und Hase produziert. In einem einführenden Ansatz wurden nach oxidativer Stressbehandlung 2D Gel Proteinanalysen durchgeführt, wobei erste Hinweise für phosphorylierte, sowie ubiquitinierte oder sumoylierte Formen von SNEV auftraten. Zur weiteren Untersuchung der Phosphorylierung wurden oxidativ gestresste Lysate mit Phosphatase behandelt wobei, nach Auswertung mittels SDS PAGE, ein eindeutiger Beweis für die Phosphorylierung von SNEV durch oxidativen Stress gefunden wurde. Die Ubiquitinierung wurde weiters untersucht, indem versucht wurde ubiquitinierte Formen von hisSNEV nach Ubiqutinaldehydbehandlung durch NI2+NTA Aufreinigung anzureichern. Eventuelle Sumoylierungen wurden untersucht indem Hela Zellen mit der Desumoylase SENP6 transfiziert wurden, wobei aber kein Einfluss auf die Stabilität von SNEV gefunden werden konnte. Neben oxidativem Stress wurde auch DNS Beschädigung, nämlich die Bildung von DNS Doppelstrang Querverbindungen ausgelöst durch Psoralen und UVA Behandlung, als Stressfaktor untersucht. Dabei konnte festgestellt werden, das SNEV nach PUVA Behandlung überexprimiert wird, was SNEVs wichtige Rolle im DNS Reparaturmechanismus bestätigt.
- Beurteilende(r): Grillari Johannes