Wasseranalyse und Reinigungstechniken basierend auf Plantibodies
Abstract
Während die Verwendung von gentechnisch veränderten Pflanzen für die Bioremediation, d.h. die insitu Reinigung kontaminierter Standorte, schon länger bekannt ist, wurde der Produktion von Antikörpern in Pflanzen und deren ex vivo Anwendung zur selektiven Abreicherung bisher kaum Beachtung geschenkt. Daher sollen im Forschungsvorhaben hoch affine und spezifische Antikörper (Plantibodies) gegen Algentoxine am Beispiel der Microcystine kostengünstig in Pflanzen produziert werden. Die Basis bildet ein in einem früheren Forschungsprojekt generierter monoklonaler Antikörper (Mab 10E7, Spezies: Maus). Nach dessen Sequenzierung soll eine für Pflanzen optimierte Sequenz der variablen Domänen synthetisch hergestellt und diese in geeignete Vektoren, die bereits die konstanten Antikörpersequenzen enthalten, zur stabilen Pflanzentransformation subkloniert werden. Zusätzlich soll ein scFv Fragment mit unterschiedlichen Tag-sequenzen und Fusionsproteinen konstruiert werden. Es kommen sowohl Blatt-basierte (Tabak) als auch Samen-basierte (Gerste) Systeme zum Einsatz. Die affinitätsgereinigten Plantibodies werden mittels Mikrotiterplatten-ELISA und Oberflächenplasmonresonanz (SPR) bezüglich ihrer Bindungseigenschaften detailliert charakterisiert. Als Referenz dient der monoklonale Maus-Antikörper. Im Hinblick auf die Wirtschaftlichkeit für die spätere Anwendung sollen für das Upscaling zudem auch nur grob aufgereinigte Fraktionen (sequentielle pH- und Temperaturbehandlung mit anschließender Filtration) getestet werden. Nach erfolgter Immobilisierung der Plantibodies bzw. der Partikelfraktion auf geeigneten Trägermaterialien, z.B. Membranen, porösen Polymer-Monolithen bzw. in porösen Gläsern, wird deren Einsatz für die Abreicherung definiert mit Microcystinen gespikter Modellwasserproben geprüft.
Publikationen
Mitarbeiter*innen
Eva Stöger
Univ.Prof. Mag. Dr.rer.nat. Eva Stöger
eva.stoeger@boku.ac.at
Tel: +43 1 47654-94001, 94311
Projektleiter*in
01.07.2013 - 31.12.2016