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Gewählte Dissertation:
Irene Pfaffenzeller
(2005):
USING COLE1 DERIVED RNAI FOR SUPPRESSION OF A BACTERIAL ENCODED GENE: IMPLICATION FOR A NOVEL PLASMID ADDICTION SYSTEM.
Dissertation,
BOKU-Universität für Bodenkultur.
UB BOKU
obvsg
- Abstract:
- Beim Einsatz von Plasmid DNA in der Gentherapie und DNA Vakzinierung ist es notwendig, dass Antibiotika-Resistenzgene und andere Sequenzen auf dem Plasmid, welche jedoch für die Selektion im Wirtsstamm Escherichia coli notwendig sind, vermieden werden. In dieser Arbeit wird ein alternatives Host-Vektor-System vorgestellt, bei welchem die Selektion auf einer RNA-Antisense Reaktion beruht, die vom natürlich vorkommenden Replikationsinhibitor des Plasmides vom Typ ColE1, der RNAI ausgeführt wird. Es wurden Bakterienstämme konstruiert, bei denen die Expression von Green Fluorescent Protein (GFP) durch die Anwesenheit von pBR322, in Schüttelkolben und Fermentationen unterdrückt wurde. In anderen Stämmen konnte GFP durch den selben Mechanismus der RNA/RNA Interaktion induziert und nicht nur inhibiert werden. In diesem Fall inhibierte das Plasmid die Translation eines Repressors (tetR) und GFP wurde vom entsprechenden Promoter (pLtetO) kontrolliert. Wenn GFP durch ein essentielles Gen (z.B. murA) ersetzt wird, dann kann dieser Mechanismus für eine antibiotikafreie Selektion von therapeutischen Plasmiden verwendet werden.