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Gewählte Diplomarbeit / Masterarbeit:

Barbara Butzendobler (2009): Development of a cGMP-conform Reporter assay to determine the biological activity of TNF alpha.
Diplomarbeit / Masterarbeit, BOKU-Universität für Bodenkultur, pp 100. UB BOKU obvsg

Datenquelle: ZID Abstracts
Abstract:
Das Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung und Optimierung eines Bioassays um die biologische Aktivität von TNFα bestimmen zu können. Das Testprinzip basiert auf der Induzierung des Luciferase-Gens durch TNFα, wodurch es zur Exprimierung kommt. Im Zuge der Optimierung konnte die gesamte Arbeitszeit auf einen Tag reduziert werden, das Handling wurde vereinfacht und die ideale Probenkonzentration für eine optimale statistische Testauswertung festgesetzt. Zusätzlich wurde der Assay für Abspülproben nach der Reinigung verwendet um darin Spuren von TNF alpha bestimmen zu können. Der Assayablauf wurde angepasst, verschiedene Lagerungsbedingungen getestet und unterschiedliche Stabilitätstests durchgeführt um den Einfluss von Säure, Base, Hitze, Wasserstoffperoxid, Trocknung und Wiederauflösen auf die Aktivität von TNFα zu testen. Schließlich wurde der Assay hinsichtlich der Validierungsparameter getestet und mit dem bereits vorhandenen Assay verglichen. Der entwickelte Assay ist innerhalb des getesteten Bereichs von 50% bis 150% spezifisch, linear, exakt und präzise hinsichtlich der Standardkonzentration.

Beurteilende(r): Vorauer-Uhl Karola

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